Cromatograffeg colofn gonfensiynol
Colofn 2.Chromatograffig (math cylchdro)
Colofn 3.Chromatograffig (Llawlyfr)
*** Rhestr brisiau ar gyfer y cyfan uchod, holwch ni i gael
Disgrifiad
Paramedrau technegol
Cromatograffeg colofn gonfensiynolYn defnyddio'r gwahaniaeth mewn cymarebau dosbarthu gwahanol sylweddau rhwng y cyfnod llonydd a'r cyfnod symudol, neu alluoedd cadw gwahanol gyfnodau sefydlog mewn perthynas â gwahanol sylweddau, i gyflawni gwahanu sylweddau. Pan fydd y gymysgedd yn llifo trwy'r golofn cromatograffig gyda'r cyfnod symudol, bydd yn rhyngweithio â'r cyfnod llonydd yn y golofn (megis diddymu, arsugniad, ac ati). Oherwydd y gwahaniaethau mewn priodweddau a strwythurau ffisegol a chemegol pob cydran yn y gymysgedd, mae maint a chryfder eu rhyngweithio â'r cyfnod llonydd hefyd yn amrywio. O dan yr un grym gyrru, mae amser cadw pob cydran yn y cyfnod llonydd yn wahanol, fel bod y cydrannau yn y gymysgedd yn llifo allan o'r golofn mewn trefn benodol, gan gyflawni gwahanu.
Baramedrau
Canfod gweddillion plaladdwyr
 |
 |
 |
 |
Rydyn ni'n aml yn dweud hynnyCromatograffeg colofn gonfensiynolyw gwahanu cromatograffeg colofn mewn gwirionedd, a elwir hefyd yn gromatograffeg colofn. Cafodd ei ddyfeisio a'i ddefnyddio gyntaf gan wyddonwyr Rwsiaidd ym 1903. Fe wnaeth falu toddiant o bigmentau planhigion i mewn i bowdr calsiwm carbonad a dod o hyd i fandiau lliw gwahanol ar y powdr calsiwm carbonad o'r top i'r gwaelod. Trwy wahanu a thynnu bandiau lliw gwahanol, cafwyd cloroffyl cymharol bur, lutein, ac ati.
Ar ôl can mlynedd o ddatblygiad, mae'r dull hwn wedi dod yn gymharol aeddfed, ac mae'r cyfnod llonydd hefyd wedi esblygu o un powdr calsiwm carbonad i alwmina (y gellir ei rannu'n asidig, niwtral, alcalïaidd), gel silica, carbon wedi'i actifadu, ac ati. Yn eu plith, mae gel silica silica yn rhydd amlycaf yn gyffredinol, yn gyffredinol mewn labordai mawr, yn gyffredinol, yn labordy mawr, yn gyffredinol, yn labordy mawr, yn gyffredinol, yw'r llabarchau mawr yn labordy mawr, yn labordy mawr, yn labordy mawr, yn labordai mawr, yn labordy mawr, yn rhydd
Yn gyffredinol, mae angen puro a actifadu'r cyfnod llonydd (gel silica), a dylai maint y gronynnau fod yn unffurf. Mewn theori, y lleiaf yw maint y gronynnau a'r mwyaf yw'r arwynebedd fesul màs uned, yr uchaf yw'r gallu arsugniad a'r gorau yw'r effaith gwahanu.
Fodd bynnag, wrth eu defnyddio'n ymarferol, pan fydd y gronynnau cyfnod sefydlog yn rhy fach, yn aml mae dwy sefyllfa: un yw eu bod yn ysgafnach o ran pwysau ac yn hawdd arnofio yn yr awyr (ni all y corff dynol ddiraddio gel silica, a'r corff dynol, y mwyaf gwenwynig ydyw); Yn ail, gall gronynnau bach hefyd arwain at fylchau bach rhwng gronynnau, gan arwain at gyfradd llif toddyddion araf a bwyta amser; Gan gymryd silicon fel enghraifft, y maint silicon mwyaf a ddefnyddir yn fasnachol yw 200-300 rhwyll.
O ran dulliau pasio colofn, yn ychwanegol at yr offer dadansoddi awtomatig fel paratoi cylchrediad ymlaen, paratoi cyfnod hylif effeithlon, a pheiriannau pasio colofnau y soniwyd amdanynt yn gynharach, mae pasio colofn â llaw wedi'i rannu'n bennaf yn dri math: pasio colofn pwysedd atmosfferig, pasio colofn iselder, a phasio colofn gwasgedd.
Yn eu plith, mae'r iselder trwy'r golofn yn arwain at effeithlonrwydd arsugniad gwael oherwydd cyfradd llif cyflym yr elifiant, sy'n arwain at golli'r rhan fwyaf o nifer yr hambyrddau ac effeithlonrwydd gwahanu gwael. Mae'n addas ar gyfer gwahanu samplau â phlatiau TLC cymharol agored, yn enwedig ar gyfer samplau gyda dim ond un amhuredd pegynol mawr yn y cynnyrch; Treulir y rhan fwyaf o'i amser ar rag-drin cyfansoddion, gan gael gwared ar rai amhureddau cyn eu puro'n ofalus. Dylid nodi y gall anweddiad toddyddion a achosir gan bwysau negyddol wrth ei ddefnyddio arwain at gyddwysiad nifer fawr o ddefnynnau dŵr ar wyneb allanol y golofn. Ni ddylid ceisio'n hawdd cyfansoddion sy'n sensitif i ddŵr.
Pasio colofn pwysau atmosfferig yw'r dull gwahanu mwyaf effeithiol ymhlith y tri, ond oherwydd bod y toddydd yn aml yn symud yn rhy araf, gall hyd yn oed yr effaith gwahanu orau effeithio ar effeithlonrwydd. Felly, mae pwysau fel arfer yn cael ei gymhwyso ar yr adeg hon, a elwir yn pasio colofn dan bwysau; Ond ni ddylai'r pwysau fod yn rhy uchel. Yn gyffredinol, defnyddir pêl cadwyn ddwbl ar gyfer gweithredu â llaw, a defnyddir pwmp pysgod ar gyfer gweithredu awtomatig. Gellir addasu'r ddau fel y dangosir yn y llun.
Proses Croesi Colofn Gonfensiynol:
Dylid gwneud gwaith paratoi yn dda:
Wrth ddewis colofn, arsylwch a oes bwrdd tywodio. Ar gyfer colofnau heb fyrddau sandio, cofiwch lenwi'r gwaelod gyda rhywfaint o gotwm. Ni ddylai'r cotwm fod yn rhy drwchus neu'n rhy denau, cyn belled ag y gall rwystro'r silicon rhag dod i ffwrdd. (Fe wnaeth y blogiwr ddatgymalu crogwr dillad yn uniongyrchol a'i ddefnyddio i fewnosod cotwm yn yr allfa ar y plwg)
Paratowch y polaredd lleiaf elifiant, lamp UV (a argymhellir ar gyfer personél labordy, llaw, yn barod i dynnu llun ar unrhyw adeg), offer pwysau, a rac tiwb prawf yn ôl yr angen!
Dewiswch golofn addas, ychwanegu gel silicon, socian y gel silicon, a'i fflatio
Y dewis ocromatograffeg colofn gonfensiynolyn bwysig iawn, a dylid cyfrif eu maint yn seiliedig ar faint o gynnyrch, y gellir ei rannu'n gyffredinol yn:
Ychydig filigramau o golofn (y dewis olaf ar gyfer cyfanswm synthesis);
Colofn o sawl degau o filigramau (swbstrad ehangu methodolegol);
500 miligram i 1 gram o golofn (gan ddefnyddio methodoleg fel deunydd crai);
Pileri tua 5g a graddfeydd mwy.
Mae'r gymhareb fwyaf cyffredin o ddiamedr colofn i uchder yn y labordy yn gyffredinol rhwng 1: 2.5 ac 1:15. Mae faint o gel silica a ddefnyddir fel cyfnod llonydd yn ystod llwytho sampl oddeutu 20 i 40 gwaith y sampl. Dylai'r safon ar gyfer dewis colofnau fod yn seiliedig ar sefyllfa dringo plât TLC eich sampl. Os oes llawer o amhureddau yn agos, ceisiwch ddewis colofn fwy cymaint â phosibl, fel y gellir gorchuddio'ch sampl â haen denau fach (trwch a argymhellir o dan 5mm). Os yw'r amhureddau'n bell i ffwrdd, gellir cynyddu'r trwch hwn yn naturiol, ond ni argymhellir bod trwch eich sampl yn fwy na 2cm, oni bai bod y cynnyrch yn cael ei olchi yn syml.
Mae llawer o bobl yn gwneud camgymeriad o feddwl y gellir ychwanegu mwy o silicon, hyd yn oed os yw'n fwy trwchus ar fy sampl, yn dda? Mae'r ateb hwn yn negyddol!
Y rheswm yw nad oedd y bobl hyn erioed wedi meddwl nad oedd y samplau isod ac uwch yn rhedeg ar yr un llinell, felly dim ond rhai pur y gallent eu cael, a chroeswyd y mwyafrif ohonynt, heb sôn am rai amhur, gwastraffu amser a thoddyddion!
Dyna hefyd pam mae angen teneuo ar y sampl!
Ar ôl dewis y golofn, gellir ychwanegu silicon trwy dwndwr bwydo. Ar yr un pryd, gwnewch yn siŵr eich bod chi'n gwisgo mwgwd ac yn gweithredu mewn cwfl mygdarth. Ni fydd y rheswm am hyn yn cael ei ymhelaethu gan y blogiwr (silicosis).
O ran ymdreiddiad gel silica, y broses a argymhellir yw: yn gyntaf, rhowch y golofn gel silica gyda'r gel silica wedi'i osod yn fertigol, gwastatáu wyneb y gel silica gyda'ch llaw, cysylltu gwaelod y golofn gel silica â phwmp dŵr, pwmpiwch y gel silica allan o uchod, ac arllwyswch uchod y pegynol. Pan fydd yr elifiant ar fin gollwng allan, caewch y falf cau i atal toddydd rhag cael ei bwmpio i'r pwmp dŵr.
Yna, dan bwysau, gellir socian y gel silicon yn unffurf trwy fflysio saith neu wyth cyfrol colofn gyda'r swm lleiaf o asiant sy'n datblygu.
Sampl uchod
Mae samplu wedi'i rannu'n samplu gwlyb a samplu sych.
(1) Samplu gwlyb.
Y dull a argymhellir yw defnyddio pibed gyda blaen rwber i sugno'r sampl, yn agos at ran uchaf y gel silicon, diferu'r sampl yn araf ac yn gyfartal nes ei bod yn gorchuddio haen, yna stopiwch ychwanegu'r sampl a chymhwyso rhywfaint o bwysau i drochi'r sylwedd olewog i'r haen gel silicon; Trochwch y sylwedd olewog i'r haen silicon ac ailadroddwch y broses hon sawl gwaith nes bod yr holl samplau wedi'u llwytho!
Efallai y bydd rhai myfyrwyr newydd yn chwilfrydig pam mae'r llawdriniaeth hon yn cael ei chyflawni yn lle gorchuddio'r olew proses wlyb fel sylwedd i gyd ar unwaith?
Mewn gwirionedd, gall y llawdriniaeth hon leihau uchder effeithiol yr haen sampl. Ar y pwynt hwn, mae cromatograffeg colofn eisoes wedi cychwyn, ac mae'r samplau dilynol fel toddyddion yn gwthio'r samplau blaenorol i adsorbio a desorb mewn gel silica.
(2) Fel ar gyfer samplu sych.
Oni bai ei fod yn hollol angenrheidiol, ni argymhellir. Argymhellir mwy o guro neu grisialu samplau solid. Argymhellir "dulliau diegwyddor, asetad ethyl yn erbyn dŵr, osciliad ultrasonic crisialu olew berwi uchel" a "rhannu dull ailrystallization labordy".
Yn gyffredinol, mae samplu sych yn dod â dwy broblem; Ar y naill law, yn ystod y broses gymysgu sampl, mae'r posibilrwydd o ymateb rhwng y sampl a gel silica yn cynyddu oherwydd yr angen i godi'r tymheredd ar gyfer anweddu cylchdro; Ar y llaw arall, mae llwytho sych yn golygu y bydd adsorbents yn cael eu cyflwyno i'r haen sampl, gan gynyddu uchder yr haen sampl neu faint y golofn, sy'n gofyn am fwy o amser a mwy o doddydd.
Os nad oes dewis arall, arllwyswch y powdr wedi'i adsorbed yn araf i'r golofn i'w lwytho, gyda rhai gofynion tebyg i ddulliau gwlyb.
Ychwanegwch sylffad sodiwm anhydrus neu dywod cwarts
Er mwyn osgoi effeithio ar yr haen sampl wrth ychwanegu elifiant, gan achosi anwastadrwydd, dadffurfiad, ac effeithio ar effeithlonrwydd gwahanu, mae haen o sylffad sodiwm anhydrus neu dywod cwarts yn gyffredinol yn cael ei osod ar ben yr haen sampl.
Yn bersonol, mae'n well gan ein peirianwyr osod sylffad sodiwm anhydrus oherwydd bod ganddo hefyd swyddogaeth sychu ac mae'n gyfeillgar i doddyddion fel deuichometomethan, sy'n dueddol o gyfnewidioli, amsugno gwres, ac anwedd!
Echdynnu graddiant, samplu a chasglu
Ar ôl ei lwytho, rinsiwch y golofn yn gyntaf gyda thoddydd pegynol bach (toddydd na fydd yn caniatáu i'r cynnyrch basio trwyddo) ar gyfer cyfeintiau colofn 2-3 (diffinnir cyfaint un golofn fel cyfaint y cyfnod symudol sy'n llifo i mewn ac allan) i sicrhau unffurf, ac yna dewis cyfran ar gyfer elution.
Sut i ddewis yr elifiant sy'n mynd trwy'r golofn?
Cymhareb elifiant yw'r gymhareb pan fydd eich cynnyrch yn cyrraedd gwerth rf o tua 0. 2 ar y plât TLC
Dyma brofiad golchi colofnau yr wyf wedi darllen llawer o lyfrau a'i rannu, ac mae'r broses wirioneddol hefyd yn debyg iawn. Yn bersonol, mae'n well gen i leihau'r graddiant ddwywaith.
Er enghraifft, os yw'r toddydd ar gyfer dringo plât TLC yn pe/ea =2: 1, mae'r blogiwr yn fwy tebygol o ddechrau elution graddiant o Pe/ea =4: 1 a diwedd yn pe/ea =2: 1, gan arwain yn gyffredinol at ganlyniadau gwell.
Mae yna hefyd dechnegau wrth gasglu elifiant. Yn gyntaf, gallwch ddewis tiwb prawf mwy i'w dderbyn, a phan fydd TLC yn agosáu at y pwynt targed, newidiwch i diwb prawf llai. Gall hyn leihau'r posibilrwydd o dderbyn mwy ac osgoi amhureddau.
Os ydych chi'n dod ar draws sefyllfaoedd lle mae pwyntiau amhuredd a phwyntiau cynnyrch yn agos at ei gilydd, yn enwedig y rhai sydd â fflwroleuedd gwan, cofiwch beidio â rhoi pwysau. Yn lle hynny, dewiswch basio'r golofn o dan bwysau arferol, a newid y tiwb bob tro y mae hanner neu lai o diwbiau wedi'u cysylltu, a all hefyd gynyddu'r tebygolrwydd puro.
Cofiwch beidio â thrin y piler mewn modd amserol!
Mae gan lawer o bobl arfer o dybio bod y golofn wedi'i phasio a'i sychu pan nad oes cynnyrch mewn un neu ddau o diwbiau ar ôl TLC yn y cam diweddarach.
Dim ond pan wnes i ei gyfrifo fod y cynnyrch yn rhy isel, neu pan euthum i wneud sbectrwm, darganfyddais fod y sbectrwm yn anghywir ac wedi colli'r pwynt anghywir. Roeddwn yn difaru yn ddwfn.
Felly argymhellir na fyddwch yn rhuthro i brosesu'r golofn ar ôl cwblhau'r pwynt a ddymunir. Yn lle hynny, perfformiwch gyseiniant magnetig niwclear i gyd -fynd â'r cynnyrch cyn ei brosesu.
Os ydych chi'n brysur neu ar frys i buro cyfansoddion eraill gyda hyncromatograffeg colofn gonfensiynol, argymhellir rinsio â thoddydd cymysg anfalaen polaredd uchel a gadael y rhan hon o'r elifiant ar wahân ar gyfer canlyniadau adnabod.
Tagiau poblogaidd: cromatograffeg colofn gonfensiynol, gweithgynhyrchwyr cromatograffeg colofn gonfensiynol Tsieina, cyflenwyr, ffatri
Anfon ymchwiliad
